APPAREILS
– IMAGERIE CELLULAIRE

Microscope confocal LSM 780

Le microscope confocal permet la réalisation de coupes optiques autorisant des reconstructions 3D résolues des échantillons. Basé sur le principe d’un balayage du plan focal par un spot laser et d’une collecte du signal émis au travers d’un pinhole conjugué à ce faisceau, tout signal fluorescent ne provenant pas du plan observé sera éliminé. On obtient alors une image nette d’un plan et grâce à un mouvement de l’objectif, les autres plans nécessaires à une reconstruction complète de l’échantillon seront acquis.

Le Microscope du plateau est un LSM 780 (ZEISS) sur un microscope inversé motorisé AxioObserver Z1.

Quatre sources d’excitation lasers sont disponibles :

• • Diode 405nm
  • Laser Argon : 458, 488 et 514nm
  •  DPSS : 561nm
  • HeNe : 633nm

Les objectifs présents sont :

• • Plan-Apochromat   10x / 0,3
  • Plan-Apochromat   20x / 0,8 DIC III
  • Plan-Apochromat   63x / 1,4 Oil DIC III

De plus l’appareil dispose d’un contrôle environnemental complet température et CO2 ainsi qu’une platine motorisée permettant de faire des acquisitions multidimensionnelles sur cellules vivantes.

Le système possède une détection spectrale permettant d’imager en simultané jusqu’à 8 composantes sur un même échantillon. Cela permet de séparer des fluorochromes dont les spectres d’excitation et d’émission se recouvrent même fortement, mais également de traiter les problématiques d’autofluorescence. Un module logiciel de FCS (Fluorescence Correlation Spectrometry) vient compléter les possibilités de réaliser les F-Techniques (FRET, FRAP, …) pour l’étude des phénomènes dynamiques et des interactions moléculaires.